你未必知道的ELISA實驗秘訣
只有不斷學(xué)習(xí)與實驗才能逐漸積累經(jīng)驗，做出更好的實驗效果。在前面的資訊內(nèi)容及技術(shù)文章中，為大家分享許多ELISA試劑盒的操作技巧、要求、方法等相關(guān)技術(shù)，我公司技術(shù)員根據(jù)自身多年【ELISA試劑盒實驗】經(jīng)驗，整理出新的ELISA操作技巧。下面我們一起來看下具體內(nèi)容，你未必知道的ELISA實驗秘訣：
1.加樣后及時放人孵箱，標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
2.顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
3.加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4.合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
5.液體全部加入酶標(biāo)孔后，*好將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
6.洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
7.吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
8.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。
9.為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
10.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。
11.作時必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
12.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
13.樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。
14.剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
15.不同批號試劑組分不得混用。
16.ELISA試劑盒實驗洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
17.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
18.用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
19.每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是*后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
20.要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其*高量程和*低量程進行確定。
21.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
22.吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
23.將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸，液滴會自然流下去。吸入液體時的*好的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細(xì)作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
24.吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
25.實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只要取出所需量。
26.由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
27.手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
28.檢測吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。
29.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
30.孵育的時間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的時間為準(zhǔn)。
31.對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
32.沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
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